核酸檢測作為新冠肺炎感染者的確診依據，在疫情防控中發揮著至關重要的作用。“內標”基因作為體現核酸檢測質量的重要指標之一，通常指實時熒光定量PCR中的內參基因，能夠對單個待測樣本本身的檢測環節進行監測，可作為質控品的有力補充。

目前獲批的核酸檢測試劑盒基本都已經加入“內標”，主要分為“外源性內標”和“內源性內標”兩種，下面我們結合實驗室經常遇到的“樣本內標擴增異?！鼻闆r，與大家討論一下，在質控滿足要求時，如何正確的認識核酸檢測中的內標基因。

常見原因：無法明確是否存在檢驗前問題，多數為檢驗中內標樣本錯加漏加、核酸加樣時錯加漏加；若連續多個樣本存在此情況，首先考慮提取試劑、提取儀的問題。

常見原因：應先明確靶基因是否同內標基因存在競爭或抑制作用，若不存在，原因同上，且該擴增孔存在污染可能。

例圖1: 典型的高濃度樣本抑制內標基因擴增。

圖 1 靶基因有擴增但內標無擴增

常見原因：外源性內標最大特點為均勻性好，故個別樣本內標離散時多為反應體系中存在抑制物；部分連續樣本內標離散時，應首先考慮提取試劑、提取儀的問題；若整板樣本內標離散時，多為擴增體系配制時未充分混勻。

例圖2: 該樣本反應體系中存在抑制物。

圖 2 單個樣本內標基因離散

例圖3: 由于磁珠殘留、加熱模塊異常，造成多個連續樣本內標基因離散。

圖 3 多個樣本內標基因離散

更換試劑、耗材、儀器等條件進行復檢；重新采樣檢測并嚴格按照sop操作等。

內源性內標有擴增不代表采樣成功，原因有3點：

1.對于混采樣本，只需1個受試者采樣成功，內源性內標就會有擴增；

2.以RNase P內標為例，如不能正確采樣，僅采集口腔甚至皮膚樣本，同樣會有內源性內標擴增；

3.環境中可能會存在人源性樣本氣溶膠污染。但是，采樣不成功時，內源性內標一定無擴增。

常見原因：實驗室較為常見，涉及范圍較廣，包括檢驗前樣本采集、保存、運送問題；檢驗中反應體系、提取、擴增問題以及人員操作問題等。

常見原因：情況極其少見，因內源性內標基因與靶基因通常無競爭或抑制作用，所以原因同上，且該擴增孔可能存在污染或非特異性擴增。

例圖4: 采樣失敗且靶基因非特異性擴增。

圖 4 靶基因非特異性擴增且內標無擴增

常見原因：由于采樣質量直接影響內標擴增結果，故曲線較離散屬于正常情況，并不一定是人員不規范操作引起的，所以這種情況較難界定。

例圖5: 若排除檢驗前問題，整體內標曲線相對離散，可能由于樣本未充分振蕩混勻或擴增體系配制時未充分振蕩混勻。

圖 5內標基因離散

更換試劑、耗材、儀器等條件進行復檢；重新采樣檢測并嚴格按照sop操作等。

常見原因：

1.可能是提取儀異常導致提取效率低，多為加熱模塊故障、磁珠異?；虼胖闅埩?；

2.可能所用的反應液放置時間過長導致擴增效率下降；

3.可能是不同的采樣管內的保存液對提取試劑的提取效率有影響。

圖 6 擴增曲線分為兩簇

常見原因：多為錯用擴增程序，如A試劑反應體系使用了B試劑的擴增程序，可重新選擇正確的熒光通道。

圖 7 內標曲線不平滑

不同的內標都各有利弊，實驗室應根據具體的使用需求，科學看待和選擇。即“有內標不一定行，但無內標一定不行”。

核酸檢測過程中的每一個操作環節都有可能影響檢測結果，所以實驗室必須規范化管理，出現樣本內標異常結果時也應細心觀察、耐心分析，采樣人員采樣時也應規范合理，最終保證核酸檢測的質量，為疫情防控保駕護航。